索氏抽提法

巴布科克法和盖勃氏法

(一) 原 理

用浓硫酸溶解乳中的乳糖和蛋白质,将牛奶中的酪蛋白钙盐转变成可溶性的重硫酸酪蛋白,脂肪球膜被破坏,脂肪游离出来,再利用加热离心,使脂肪完全迅速分离,直接读取脂肪层可知被测乳的含脂率。

(二) 适用范围与特点

这两种方法都是测定乳脂肪的标准方法,适用于鲜乳及乳制品脂肪的测定。但不适合测定含巧克力、糖的食品, 因为硫酸可使巧克力和糖发生炭化，结果误差较大。 改良巴布科克氏法可用于测定风味提取液中芳香油的含量 (AOAC 法 932.11)及海产品中脂肪 (AOAC 法 964.12)的含量。

巴布科克氏法和盖勃氏法的原理相似，盖勃氏法较巴布科克法简单快速，多用一种试剂异戊醇。使用异戊醇是为了防止糖炭化。该法在欧洲比在美国使用更为广泛。

(三) 测定方法

l.巴布科克法

(1)精确吸取 17.6 mL 牛乳于巴布科克氏乳脂瓶中。

(2)加入硫酸 (相对密度 1.816±0.003, 20℃) 17.5mL, 硫酸沿瓶颈壁慢慢倒入,将瓶颈回旋,充分混合至无凝块并呈均匀的棕色。

(3)将乳脂瓶离心 5min (约 1000r / min),脂肪分离升至瓶颈基部。

(4)加入热水使脂肪上浮到瓶颈基部, 离心 2min。

(5)再加入热水使脂肪上浮到 2 或3刻度处，离心 1min。

(6)置 55～60℃水浴 5min 后,立即读取脂肪层最高与最低点所占的格数, 即为样品含脂肪的百分率。

2.盖勃氏法

(1)将 l0 mL 硫酸倒入盖勃氏乳脂瓶中。

(2)精确吸取 11 mL 牛乳于盖勃氏乳脂瓶中。

(2)加入 l mL 异戊醇 (相对密度 0.811± 0.002, 20℃,沸程 128～132℃)。

(4)盖紧塞子，振摇至呈均匀棕色液体,静置数分钟。

(5)置于 65～70℃水浴中 5min。

(6)取出擦干,调节脂肪柱在刻度内,放入离心机(800~1000r / min)中离心 5min。

(7)将乳脂瓶置 65~70℃水浴, 5min 后取出,立即读数,即为脂肪的含量。

(四) 说明与讨论

1.硫酸的浓度要严格遵守规定的要求,如过浓会使乳炭化成黑色溶液而影响读数;过稀则不能使酪蛋白完全溶解,会使测定值偏低或使脂肪层浑浊。

2.硫酸除可破坏脂肪球膜,使脂肪游离出来外,还可增加液体相对密度,使脂肪容易浮出。

3.盖勃氏法中所用异戊醇的作用是促使脂肪析出,并能降低脂肪球的表面张力,以利于形成连续的脂肪层。

4. l mL 异戊醇应能完全溶于酸中,但由于质量不纯,可能有部分析出掺入到油层,而使结果偏高。

5.加热 (65~70℃水浴中) 和离心的目的是促使脂肪离析。

6.罗紫一哥特里法、巴布科克法和盖勃法都是测定乳脂肪的标准分析方法。根据对比研究表明,前者的准确度较后两者高,后两者中巴布科克法的准确度比盖勃法的稍高些,两者差异显著。

酸水解法原理：样品经酸水解后用乙醚提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。

酸水解法试剂：盐酸、95％乙醇、乙醚、石油醚、100毫升具塞刻度量筒

酸水解法实验过程：1、样品处理： (1)固体样品：精密称取约2克水，混匀后再加重。毫升盐酸。置于50毫升大试管内，加8毫升；(2)液体样品：称取10.0克，置于50毫升大试管内，加10毫升盐酸。

2、将试管放70-80℃水浴中，每隔5-10分钟以玻璃棒搅拌一次，至样品消化完全为止，约40-50分钟。

3、取出试管，加人10毫升乙醇，混合。冷却后将混合物移于100毫升具塞量筒中，以25毫升乙醚分次洗试管，一并倒人量筒中。待乙醚全部倒入量筒后，加塞振摇1分钟，小心开塞，放出气体，再塞好。静置12分钟，小心开塞，并用石油醚-乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪。静置10-20分钟，待上部液体清晰，吸出上清液于已恒重的锥形瓶内，再加5毫升乙醚于具塞量筒内，振摇，静置后，仍将上层乙醚吸出，放入原锥形瓶内。将锥形瓶置水浴上蒸干，置95-105℃烘箱中干燥2小时，取出放入干燥器内冷却0.5小时后称重。

酸水解法计算：

X=(m1-m0)/m2

X：样品中脂肪的含量％；

m1：接受瓶与脂肪的质量，g；

m2：接受瓶的质量，g。

MM_FS_CNG_0390 植物油脂检验杂质测定法 适用范围 本标准适用于商品植物油脂中杂质含量的测定。 说明 植物油脂中的杂质为不溶于石油醚等有机溶剂的残留物。 3.主要试剂和仪器 3.1.主要试剂 抽气泵； 抽气瓶； 安全瓶； 2号玻璃砂芯漏斗； 胶管； 称量皿； 镊子、量筒、玻棒； 天平：感量0.0001g。 3.2.试剂 石油醚（沸程60～90℃）； 95％乙醇； 酸洗石棉； 脱脂棉； 定量滤纸（代替石棉用）等。 4.过程简述 准备抽气装置：用胶管连接抽气泵、安全瓶和抽气瓶。用水将石棉分成粗、细两部分，先用粗的，后用细的石棉铺垫玻璃砂芯漏斗（约3mm厚），先用水沿玻棒倾入漏斗中抽洗，后用少量乙醇和石油醚先后抽洗，待石油醚挥净后，将漏斗送入105℃电烘箱中，烘至前后两次重量差不超过0.001g为止。 抽滤杂质：称取混匀试样15～20g（W）于烧杯中，加入20～25ml石油醚（蓖麻油用95％乙醇），用玻棒搅拌使试样溶解，倾入漏斗中，用石油醚将烧杯中的杂质干净地洗入漏斗内，再用石油醚分数次抽洗杂质，洗至无油迹为止。 烘干杂质：用脱脂棉揩净漏斗外部，在105℃温度下烘至恒重（W1）。 5.结果计算 杂质含量按下列公式计算： 杂质（％）＝ W1 ×100 W 式中：W1——杂质重量，g； W——试样重量，g。 双试验结果允许差不超过0.04％，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。 6.来源： GB 5529—85

MM_FS_CNG_0386 植物油脂检验磷脂测定法 1.适用范围 本方法适用于商品植物油脂中磷脂的测定。 2.原理概要 油脂中磷脂即由甘油、脂肪酸、磷酸和氨基醇等所组成的复杂的化合物。 3.钼蓝比色法 3.1.主要试剂和仪器 3.1.1.主要试剂 50％氢氧化钾溶液； 盐酸、硫酸、氧化锌、滤纸； 0.015％硫酸联氨溶液； 2.5％钼酸钠稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中，摇匀，冷却至室温，加入12.5g钼酸钠，溶解后加水至500ml，摇匀，静置24h备用； 磷标准溶液：称取无水的磷酸二氢钾0.4391g溶于1000ml水中，作为1号液，含磷0.1mg／ml，吸取1号液10ml，加水稀释至100ml，含磷0.01mg／ml，作为2号液，比色用。 3.1.2.仪器 瓷坩埚或石英坩埚； 分光光度计或带塞的50ml比色管； 移液管：5、10ml； 电炉、高温炉； 容量瓶：100、500、1000ml； 表面皿、烧杯、量筒； 恒温水浴锅； 漏斗、坩埚钳、试剂瓶等。 3.2.样品制备 用坩埚称取试样约10g（准确至0.001g），加氧化锌0.5g，先在电炉上加热炭化，然后送入550～600℃的高温炉中灼烧至灰化（白色），灼烧时间约2h，取出坩埚冷却至室温，用热盐酸（1∶1）10ml溶解灰分，并加热微沸5min，将溶解液过滤注入100ml容量瓶中，用热水冲洗坩埚和滤纸，待滤液冷却至室温后，用50％氢氧化钾溶液中和至出现混浊，缓慢滴加盐酸使氧化锌沉淀全部溶解后，再滴2滴，最后用水稀释至刻度，摇匀。 3.3.过程简述 3.3.1.绘制标准曲线：取5只50ml比色管，编成1，2，4，6，8五个号码，按号码顺序分别注入磷标准2号液1，2，4，6，8ml，再按顺序分别加水9，8，6，4，2ml。接着向5只管内各加0.015％硫酸联氨溶液8.0ml；各加钼酸钠稀硫酸溶液2.0ml，加塞、摇匀。去塞，将5只管置于正在沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，用水稀释至50ml，充分摇匀，经10min后，用分光光度计在波长650nm下，用3cm液槽，用水调整零点，分别测定消化值。以消化值为纵坐标，以磷量（0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mg）为横坐标绘制标准曲线。 3.3.2.比色：用移液管吸取被测液10ml注入50ml比色管中，加入0.015％硫酸联氨8.0ml，加2.0ml钼酸钠稀硫酸溶液，加塞，摇匀。去塞，将比色管置于正在沸腾的水浴中加热10min，取出冷却至室温，用水稀释至50ml，充分摇匀，经10min后，用分光光度计在波长650nm下，用3cm液槽，用水调整零点，测定消光值。 3.4.结果计算 根据被测液的消光值，从标准曲线查得磷量（P），按公式（1）计算磷脂含量： 磷脂（％）＝P× V2 ×26.31× 100 ……………………（1） V1 W×1000 式中：P——标准曲线查得的磷量，mg； V2——样品灰化后稀释的体积，ml； V1——比色时所取的被测液体积，ml； 26.31——每毫克磷相当于磷脂的毫克数； W——试样重量，g。 3.5.允许差 双试验结果允许差不超过0.04％，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。 4.重量法 4.1.主要试剂和仪器 4.1.1.主要试剂 丙酮。 4.1.2.仪器 玻璃漏斗、漏斗架； 烧杯：100ml； 锥形瓶、滤纸等。 4.2.过程简述 取混匀的样品约100ml，加热约90℃时进行过滤。用烧杯称取试样25g，加热至80℃，加水2～2.5ml，充分搅拌使之水化，在室温下静置过夜，或进行离心沉淀，倾出上层清液，用已知恒重的滤纸（或用抽气装置抽滤）进行过滤，待滤液全部滤出后，用冷的丙酮把杯内残留的沉淀冲洗入滤纸中，继续用丙酮洗涤滤纸和沉淀，洗至无油迹为止。待滤纸和沉淀上的丙酮挥尽后，送入105℃烘箱中烘至恒重。 4.3.结果计算 重量法测定磷脂含量按公式（2）计算： 磷脂（％）＝ W1 ×100………………………………………（2） W 式中：W1——沉淀物重量，g； W——试样重量，g。 4.4.允许差 双试验结果允许差不超过0.04％，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。 5.来源： 中国国家标准：GB5537—85

MM_FS_CNG_0387 植物油脂检验含皂量测定法 1．适用范围 本方法适用于商品植物油脂含皂量的测定。 2．原理概要 油脂中的含皂量，即油脂经过碱炼后，残留在油脂中的皂化物数量（以油酸钠计）。 3.主要试剂 石油醚：沸点60～90℃； 95％中性乙醇； 0.2％甲基红乙醇溶液； 0.02N硫酸溶液； 无水碳酸钠。 4.过程简述 称取混匀试样约10g（W），注入干燥的锥形瓶中，加入乙醇10ml和石油醚60ml，摇动，使试样溶解后，缓慢加入80℃的蒸馏水80ml，振摇使成乳状，滴入3滴甲基红指示剂，趁热逐滴加入0.02mol/L（1/2H2SO4）硫酸溶液，每加一滴振摇一次，滴至分层下的溶液显出微红色为止。 5.结果计算 油脂含皂量按下列公式计算： 含皂量（％）＝ V×N×0.304 ×100 W 式中：V—— 滴定用去的硫酸溶液体积，ml； N—— 硫酸溶液的（1/2H2SO4）摩尔浓度； W——试样重量，g； 0.304—— 每毫克摩尔（1/2H2SO4）硫酸相当于油酸钠的克数。 两次试验结果允许差不超过0.02％，求其平均数，即为测定结果。测定结果取小数点后第二位。 6.来源： 中国国家标准：GB5533—85

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